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液相色谱反相系统梯度洗脱鬼峰解决方案

判断是不是鬼峰,可以通过不进样,或者进流动相,或者只运行方法看基线中是否还存在莫名的色谱峰。

 
鬼峰的类型

鬼峰分为三种类型:

第一种,空白出峰,但是保留时间和目标物相距较远,对目标峰不会有干扰,通常情况下这种鬼峰我们不需要过多关注。

 

 

第二种,空白出峰,出峰时间和目标物相近,可以作为保留时间的标志物来帮助目标物定性,对目标物的定量结果不会产生影响,并且知道该鬼峰的产生来源,例如来自流动相配置或样品过滤可能碰见的增塑剂。

 

 

但是有个特殊情况,乙腈由于制备工艺较复杂,在某些波长下会出现鬼峰吸收

通常我们可以选择调整流动相比例让该鬼峰不影响色谱图中目标物的分析定性和定量,这种鬼峰也可以不作为我们考察的对象。

 

 

第三种,空白出峰,对目标物的定性定量有干扰,这种鬼峰就是我们接下来要主要解决的问题了。

 

 
鬼峰出现原因和解决办法

通常情况下,如果出现鬼峰,首先排查进样小瓶洗针瓶是否有隔垫残留

 

 

接下来可以分成两个大方面进行考虑:流动相液相系统

建议大家在碰见鬼峰时先考虑流动相的问题。

 

1流动相问题和解决办法

 

而针对流动相问题,我们还可以再次一分为二进行判断,是有机相问题呢?还是水相问题?我们一条条来看。

 

有机相
 
 
 
液相色谱的有机相建议使用色谱纯的有机溶剂,而大多数有机相问题来自于你购买的有机相流动相可能混入了杂质

 

一般情况下这种问题在更换了新批次的有机相后出现。所以希望大家的实验室,有机相的购买、更换都能够有记录,做到有据可查

 

 

同时也提醒各位同学,更换流动相批次之前,记得留下一些前一批次的流动相做对比。

 

 

水相
 
 
 

水相的问题来源于两个方面:水本身和水相中的添加物如缓冲剂、TFA等。

 

 

液相色谱的水相建议使用二级以上的纯水,并且建议每天更换,如果没有,也可以暂时使用娃哈哈纯净水等替代。

 

 

如果怀疑是水相导致的鬼峰问题,可以通过更换水相来判断和解决。

如果怀疑是水中的添加物如缓冲剂导致鬼峰,可以更换另一批次的添加剂,重新配置水相流动相来判断和解决这个问题。

 

 

2液相系统问题和解决办法

 

当流动相的问题被排除之后,我们通常考虑来自液相系统问题导致的鬼峰。那有哪些可能的来源,如何判断和解决呢?

 

首先,可能是流动相溶剂瓶内的污染和溶剂瓶内流动相过滤头的污染。

 

判断方式更换或清洗溶剂瓶看鬼峰问题能否被消除。

去除溶剂瓶内的过滤头看鬼峰能否变小或消失,如果变小或消失则可以更换溶剂瓶内的过滤头。

 

 

第二,来自进样器的样品残留。

 

 

判断方式:将进样器的入口和出口管线更换成两通跳过进样器直接连接,如果鬼峰问题解决则高度怀疑进样针,针座、六通阀转子污染问题。

 

 

需要注意的是,在怀疑这些问题之前也要先检查六通阀的连接管线是否正常,管线接头不匹配也会导致鬼峰。

 

 

如果是进样针、针座六通阀转子污染则要进行相关的清洗和更换

 

第三,  来自色谱柱的样品残留。

 

判断方式:将色谱柱更换成两通或阻尼管,如果鬼峰消除则是色谱柱被污染。

 

 

接下来就要清洗色谱柱了,具体怎样清洗和再生,可以看色谱学堂以前的文章。必要时还需要更换新的色谱柱

 

需要注意的是,因为阻尼管或两通对样品的保留和色谱柱的保留值不同,所以如果色谱图出现保留时间漂移的鬼峰则需要进一步排查鬼峰问题哦!

 

第四,  来自真空脱气机故障。

 

判断方式:将溶剂入口管线人为地引入一段气泡,看脱气机出口气泡能否变小,如果没有明显变小则很可能是脱气机故障。这时,需要更换或维修真空脱气机

 

 

第五,  泵的单向阀失灵或堵塞。

 

判断方式:此处可以通过泵压力出口管线的流路是否正常来判断。

 

 

如果是单向阀堵塞或失灵,在仪器公司允许的情况下可以超声清洗,超声清洗效果不好则需要考虑更换。

 

 

第六,  在线过滤器或保护柱有污染物残留。

 

这种情况可以通过更换在线过滤器和保护柱来判断及解决。

 

 

第七,  仪器管路污染残留。

 

液相系统各部件的连接管路以及内部流路众多,仪器管路污染导致的鬼峰较难排查,只有通过排除前面所有的问题来判断。

 

 

当确定是管路污染导致的鬼峰问题时,需要清洗系统,更换管路

比较直接的办法是先移除流路中的色谱柱和流通池,色谱柱用两通替代,流通池入口管线直接连接到废液瓶中。

清洗液相系统可以先用高比例水相移除缓冲盐,再用有机相冲洗系统直至污染物被冲出。

 

 

好了,这么多内容大家是不是觉得很繁杂?

本期主要是帮助大家了解解决鬼峰问题的思路,实际遇到鬼峰问题时,可能只需要在流动相上就可以找到原因和解决办法。

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