1. 主页 > 分享宝典 > 分析秘籍 >

柱子被我用水冲塌了,咋办?!

很多时候,做液相色谱的同学会发现,长时间将C18色谱柱处于高水相的条件下,会导致保留性能的下降,柱效的降低。很多时候,长时间的高有机相的冲洗和平衡,可以将色谱柱恢复正常。

 

经典的解释是:色谱柱固定相塌陷了!

 

 

也就是下面这个样子: 
 

(a)正常情况下的C18;(b)在高水相情况下,出现塌陷C18
图片来源:参考文献[1]
 

但是这种解释没有经过系统的研究以及相关的支持证据。

 

固定相去湿理论

 

Kazakevich和他的同事们提出并通过实验证实了固定相去湿理论。

 

简单来说,就是因为100%的水相流动相无法进入全部的疏水填料的孔道。

 

 

首先我们知道,水是具有一定张力的,在一个疏水的环境中,它会呈现下面的形状。在越疏水的界面,水的张力角度越大,这也就是水相在C18色谱柱中发生的情况。

 

图片来源:参考文献[1]

 

我们都知道,反相色谱柱内部硅胶小球是多孔的结构,内部有各种微小孔道,内壁上是疏水的C18长链。

图片来源:色谱学堂自制
 

如果流动相是非极性的,那么很容易就能进入这些孔道。

低水相的流动相顺利进入孔道
图片来源:色谱学堂自制

 

但流动相是高水相的话,就可能因为水的强大张力,无法进入孔道,也就意味着需要分析的样品无法跟C18链接触,从而导致色谱柱保留性能的降低。

  高水相的流动相因为水的张力无法进入孔道
图片来源:色谱学堂自制

 

流动相中溶解的气体

 

Xiaodong Liu在固定相去湿理论上进一步提出,流动相中溶解的气体,在固定相因为去湿导致的保留能力降低的过程中,起到了相当重要的影响作用。

 

 

虽然绝大多数的液相色谱系统都会配有在线脱气机,但是进入色谱系统的流动相,或多或少都会含有溶解的空气。

 

图片来源:pixabay
 

在高水相中,流动相中溶解的气体会更容易被固定相所吸收,时间一长就会产生饱和,在色谱柱压力较低的部位,比如靠近出口的地方,从固定相中就可能会有气泡析出

 

这种气泡是从固定相中产生的,它们跟流动相中直接析出的气泡不一样的地方是,它们在填料的小孔中,一方面阻止了流动相的进入,直接导致了固定相的去湿,另外也更加难被冲出来,或者说需要更大的压力才能把这些气泡冲出来。

 

那应该怎么办呢?

 

所以,如果你的实验需要使用很高水相条件,那应该怎么办呢?

1

 

高水相专用色谱柱

首先,当然是使用高水相专用的色谱柱啦。

各家公司都陆续推出了适用于高水相条件下使用的C18色谱柱。虽然他们没有公布具体的技术方案,但是绝大多数都在着眼于让流动相更容易进入固定相的孔道中,这也是目前可靠的办法。

 

2

 

高有机相冲洗

如果你使用普通的C18色谱,偶尔做了高水相的方法,或者不小心用纯水冲了色谱柱,也不用太担心。用高有机相,在较高压力下冲洗一段时间,基本都可以将色谱柱恢复正常。

图片来源:色谱学堂自制

3

 

避免压力突然降低

在跑样的过程中,特别是高水相的条件下,尽量避免突然的压力降低。这样可能会导致气体溶解度的降低,微小气泡的析出,从而导致固定相去湿的发生。

 

4

 

更换色谱柱

在某些情况,有些色谱柱细小孔径里面的小气泡非常难被冲出来,这样可能会造成永久性的色谱柱的保留性能的降低。

图片来源:pixabay

本站部分文章、资源来自互联网,版权归原作者及网站所有,如果侵犯了您的权利,请及时致信告知我站.:http://17sohu.com/a/yingxiao/duanshipin/2020/0711/270.html

联系我们

在线咨询:点击这里给我发消息

微信号:kindmelody

工作日:9:30-18:30,节假日休息