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20多种药物中基因毒性杂质检测方法文献简述

药物注册申报过程中常见的发补:根据相关文献、参比制剂的情况,通过对生产工艺、产品降解途径的分析,判断是否可能产生潜在的遗传毒性杂质,必要时进行针对性的研究。对于药物研发而言,基因毒性杂质是主要研究模块之一。

本文对20多种药物中的基因毒性杂质检测进行了简单的描述,仅供读者参考,翻译过程可能有所疏漏,一切以原文为准。
 

1.HPLC法检测阿瑞吡坦中对甲苯磺酸甲酯与对甲苯磺酸异丙酯基因毒性杂质。

1.1 基因毒性杂质

对甲苯磺酸甲酯与对甲苯磺酸异丙酯

1.2 限度计算

药周期小于30天,TTC值为120µg/天日摄入量,药物日最大剂量125mg,杂质限度订为480ppm

1.3 检测方法

测试了三种具有不同选择性的分析柱,包括 Zorbax SB -C8-C18  -Phenyl(内径为150 × 4.6 mm,在所有情况下均为 3.5 μm)(安捷伦科技公司)。最终选择 Zorbax SB-C18 上使用二元梯度洗脱程序进行。 流动相 A  B 分别为 0.1% v/v H3PO4 水溶液和乙腈。 梯度洗脱步骤包括 10% B 的初始含量,在 28 分钟内线性增加至 80%,然后在 2 分钟内更改为初始组成 (10% B),然后是 10 分钟的色谱柱平衡时间以获得可重现的分离。流速保持恒定在 1.3 mL min-1,而进样体积为 25 μL 色谱柱柱温 35℃,检测波长 225 nm在进样之间,使用 50/50 % v/v /乙腈清洗自动进样器以去除任何样品残留物。

1.4 方法灵敏度

LOQ48ppmLDQ16ppm

1.5 参考文献

Application of Analytical Quality by Design principles for thedetermination of alkyl p-toluenesulfonates impurities in Aprepitant by HPLC.Validation using total-error concept. Journal of Pharmaceutica land BiomedicalAnalysis

2. LC/MS/MS测定美罗培南中3中基因毒性杂质

2.1 基因毒性杂质

合成工艺路线中的三个硝基苯类中间体(S5M9318-BP)。

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2.2 限度

TC 1.5µg/day,最大日摄入量6g,限度:1.5µg /6g=250ppb

2.3 分析方法

供试品浓度:30mg/ml

流动相:乙腈:甲醇:0.09%甲酸(71/3.5/15.5 v/v );

流速:0.5ml/min

色谱柱: Nucleosil 100-3 C18, 150 x 4.6 mm 分析柱(Macherey-Nagel,德国);

检测波长:267 nm 处检测所有杂质(318BPM9S5; 298 nm 检测美罗培南。

柱温:25 ± 2 °C 等度洗脱。进样量20 μL

质谱: 离子源喷雾温度450 ℃,离子喷雾电压设置为 4800 V。帘气设置为 6.0 a.uarbitrary units),碰撞气体为 8.0 a.u arbitrary units.,雾化器气体 (GS1) 设置为10 arbitrary units)。涡轮离子喷雾气体 (GS2) 的流速为 7 L/min318BPM9S5 和奥美拉唑的去簇电位 (DP) 设置为 56 V46 V350 V  75 V318BPM9S5 和奥美拉唑的聚焦电位 (FP) 分别设置为 340 V90 V240 V 220 V 318BP 的碰撞能量设置为 125 eVM9  105 eVS5  65 eV,奥美拉唑为 35 eV。选择多(MRM) 作为扫描模式,检测母离子  产物离子,每个跃迁的驻留实际为 150 毫秒,停顿时间为 5 毫秒。 318BPM9S5 和奥美拉唑的 m/z 转化分别为 699.2 → 78.8595.6 → 78.7354.3 → 78.7  345.9 → 198.2

2.4 方法灵敏度

美罗培南 PGI LOD 值:318BPM9  0.242 ng/mL (8.09 ppb)0.364 ng/mL (12.12 ppb)  0.121 ng/mL (4.04 ppb) S5,分别。 ppb 值是根据美罗培南 (30 mg/mL) 的测试浓度估算的。对方法进行了系统的验证,限度从10%-200%范围均符合相关标准。

2.5参考文献Chemometricallyassisted development and validation of LC-MS/MS method for the analysis ofpotential genotoxic impurities in meropenem active pharmaceutical ingredient.  Journal of Pharmaceutica land Biomedical Analysis

3 LC-MS测定阿扎那韦硫酸盐中潜在基因毒性杂质

3.1 基因毒性杂质

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3.2 杂质限度

 TCC1.5µg, 最大日摄入量: 300mg, 限度1.5µg/300mg=5ppm:文章中限度3.8ppm

3.3 检测方法

供试品浓度:1mg/ml

HPLCThe method was carried out using Symmetry C18, 75 mm length, 4.6 mmid and 3.5 micron particles size (Waters Corporation, Milford, Massachusetts,USA). The eluent was a 0.01 M ammonium formate (pH adjusted to 3.0±0.05, withdilute formic acid), Acetonitrile and methanol in the ratio 50:40:10 (v/v/v).The flow rate, column oven temperature and auto sampler temperature were set as0.4 mL/min, 30 and 10  respectively. The injection volume was set as 15 µL.

MSLC-MS analysis was carried out on LC-MS 2010 EV single quadrupolemass spectrometer having LCMS solutions software (Shimadzu Corporation, Kyoto,Japan). The voltages of interface, CDL and detector were set as 4.5 KV, 5 V and1.9 KV respectively. The temperatures of interface, CDL and heat block werekept as 250, 250  and 200  respectively. The nebulisation gas flow was 1.5 mL/min.

3.4 灵敏度

小检测限度:0.3ppm;线性范围:1.1-5.7ppm

3.5 分章分析

GTI-A为潜在基因毒性杂质,其中警示基团为苯肼的结构;该结构与API中的一致,按照ICH M7应归为5,但实际按照基因毒性杂质进行研究与控制。

3.6 参考文献Determination of Genotoxicimpurity in Atazanavir sulphate drµg substance by LC–MS.Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis

4. 离子色谱检测盐酸异丙肾上腺素中基因毒性杂质氯乙酸的残留.

4.1 基因毒性杂

氯乙酸(备注:该杂质为已知限度杂质,限度较高,实际为非基因毒性杂质)

4.2 检测方法

样品浓度:0.5mg/ml;

流动相The mobile phase was a mixture of 4 mM of sodium-bicarbonate and 0.5mM of sodium carbonate in water. Filter throµgh 0.45 µ finer porosity membrane filter.

色谱柱:The analysis was carried out on METROSEP ASUPP 5(6.1006.530), 250 mmlong, 4.0 mm i.e., 5 µm particle diameter column, maintained at ambientconditions. 流速:Mobile phase was pumped throµgh the column at a flow rate of 0.5mL/min. 运行时间:30 min.

进样体积: 20 µL.

The retention time of chloroacetic acid is about18 min. Water is used as diluent.

柱温: not exceed 30 °C.

抑制液:Suppressor solution: Transfer carefully about 5.6 mL of sulfuricacid to 1000 mL of water. [For Metrohm system] (OR)Transfer carefully about 4mL of sulfuric acid to 4000 mL of water [For Dionex system].

4.3 方法检测限度

LOQ33ng/ml6.6ppm,相对于供试品浓度);

LDQ99ng/ml20ppm,相对于供试品浓度);

4.4 参考文献Ion Chromatographic Method for Determination of Chloroacetic Acid inIsoproterenol Hydrochloride Drµg Substance: A Genotoxic Impurity in TraceLevels

5. HPLC柱前衍生法测定伏立诺他&齐留通中基因毒性杂质羟胺

5.1 基因毒性杂质

OH-NH2

5.2 限度

CC1.5µg /day

5.3 测定方法

色谱柱: Phenomenex Curosil PFP column (P/NO: 00G-4012-E0, 250mm×4.6mm,5µm, Phenomenex Inc., CA, USA)

流动相:Mixture of methanol and 0.5% formic acid solution (pH adjusted to3.0 with ammonia solution) (85:15, v/v) at 1.0 mL/min.

波长: The wavelength was set at 264 nm.

衍生方法: 100 µL of water, 100 µL of sodium borate buffer solution and 400µL of FMOC-Cl solution were added to 2 mL eppendorf tube containing 100 µL ofthe test solution. The mixture was vortexed and reacted at 0 °C for 20 min. 30µL of 2 mol/L citric acid solution was then added to terminate the reaction. 20µL of the resulting solution was injected into the HPLC system to quantify thehydroxylamine derivative of FMOC-Cl by external reference standard method.Blank solvent and the reference solution were also derivatized and analyzed inthe same way.

5.4检测限度

10ng/ml0.33 ppm (w/w) of hydroxylamine in 30 mg/mL API(注意事项: 样品需进行前处理,加水逼晶,离心去除API);

 

备注: 样品没有前处理的,回收率不符合要求;

5.5 线性

10 to 400 ng/mL (equivalent to 0.3~13.3 ppm) with the r value of0.9993 for hydrous condition.

5.6 衍生机制

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5.7 质谱结果

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5.8 文章体会

FMOC-Cl衍生化物HPLC测定灵敏度非常高;样品的前处理对于基因度性杂质的检测很重要。

5.9 参考文献Selective and sensitive pre-column derivatization HPLC method forthe trace analysis of genotoxic impurity hydroxylamine in active pharmaceuticalingredients

6. 一种灵敏和选择性好的GC-MS方法用于测定盐酸多巴酚丁胺中基因毒性杂质。

6.1 基因毒性杂质

对甲苯磺酸甲酯、甲苯磺酸乙酯、甲苯磺酸异丙酯。

6.2检测方法

色谱柱:HP-5 ms 30mX0.25mm, 0.25µ column,

配液体系: 0.1% Diethyl amine in methanol

设备:Agilent 7890B Gas chromatograph equipped with 5977A Mass selectivedetector.

升温程序:The oven programme consists of Initial the oven is programmed at60°C for 3 minutes, then increased at the rate of 25°C/min up to 250°C, holdthe temperature at 250°C for 10.5 minutes, Injector temperatue is put at 200°C,Auxiliary temperature at 300°C.

载气: Helium (High purity 99.999%),

流速:.4 mL/min and the split ratio is 1:10

进样量:1.0 µL

时间: 21 minutes.

质谱: SIM(Selective ion monitoring), having the source temperature at230°C and quadrapole temperature at 150°C, solvent delay time is put for 7minutes. The SIM parameters are Group id is 1, high resolution and theions/dwell time are 155/100, 172/100, 186/100, 200/100, 214/100.

6.3 检测限度

文章检测限度如下所示。

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上述表述应该有误,第一行应该是limit of detection;第二行是limit of quantification.

6.4 参考文献:A Sensitive and Selective GC-MS Method for Analysis of GenotoxicImpurities in Dobutamine Hydrochloride.

8. 利伐沙班潜合成路线中遗传毒性中间体—5-氯噻吩-2-羰基氯化物水解和酯化衍生后产物采用HPLC法测定比较

8.1 潜在遗传毒性杂质

 

8.2 限度计算

TCC1.5μg/day;最大日摄入量10mg/day;限度:150ppm

 

8.3 检测方法

色谱柱:Chromatographic separation was performed on a Hedera™ C6H6 column(250 mm × 4.6 mm, 5 μm).

流动相: 10 mM NaH2PO4 (pH 3.0) buffer solution/acetonitrile (60:40;v/v) using an isocratic elution

流速: 1.2 mL*min−1.

柱温: 30 °C;

进样体积: 20 μL;

检测波长; 274 nm.

衍生化样品配制:

(1)  水解样品配制

In the hydrolysis method, spiked samples were prepared bytransferring about 20 mg RIVA drµg substance and an appropriate amount ofCTCC stock solution (0.4, 0.8, 1.2, 2.0, 3.0 and 4.0 mL) into separate10 mL volumetric flasks. After addition of 8 mLacetonitrile/30 mM Na2CO3 (60:40; v/v) solution and sonication forcomplete dissolution, the flasks were capped tightly and heated in a water bathat 60 °C for 60 min. 60 μL of 5 M HCl was added to stop thehydrolysis reaction and neutralize the basic reaction solution. Then,acetonitrile/30 mM Na2CO3 solution was added to the scale mark of thevolumetric flask.

(2)  酯化样品配制

In the esterification method, spiked samples were preparedby transferring about 20 mg RIVA drµg substance and an appropriate amountof CTCC stock solution (the same as in the hydrolysis method) into separate10 mL volumetric flasks. After addition of 200 μL glacial acetic acid and 8 mLacetonitrile/methanol (30:70; v/v) solution and sonication for completedissolution, the flasks were capped tightly and then placed in an ultrasonicbath at room temperature for 30 min. Then, acetonitrile/methanol solutionwas added to the scale mark of the volumetric flask.

 8.4 转化机制

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8.5 实验结果

8.5.1 水解反应条件考察

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a:没有催化剂的条件下,水解的回收率最多只能到80%

 

图b 不同催化剂的回收率,只要碳酸钠符合要求;

c:碳酸钠作为催化剂的条件下,只有25℃符合要求;

个人体会:上述结果说明图c: 酰氯结构本身活性较高,可能存在的副产物较大;图a:说明酰氯的水解不一定完全彻底;因此,仅仅通过理论阐述酰氯的结构容易水解就不需要进行控制,依据是不充分的。此外,通过测定水解产物,也可能存在一定的干扰,如样品中含有水解产物杂质;

 

8.5.2酯化反应

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4a:样品在冰醋酸条件下,回收率较好,接近100%

图4b:不同温度条件下,回收率均符合要求;

图4c:水的比例小于2%时,影响较小;

8.6 .采用上述两种方法对样品进行检测

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注意:上述结果表明水解法和酯化方法可以检测到CTCA,而酯化方法均未检出(MCTC);说明样品中本身就存在CTCA,造成假阳性事件。

8.7 个人体会

1)采用衍生法测定基因度性杂质时,应该尽量避免样品本身就可能有该衍生话产物造成假阳性事件,文中已有提及;

2)酰氯类基因毒性杂质,低浓度下未必可以完全降解;

3)该文献为酰氯类化物的检测提供了很好的参考思路,也是目前最常用的两种研究方式。

4)文章的检测限度150ppm

8.8 参考文献Comparison of the Hydrolysis and Esterification Methodsfor the Determination of Genotoxic 5‑Chlorothiophene ‑2‑Carbonyl Chloride in Rivaroxaban Using HPLC(该文章为国内基毒研究知名学者郑教授研究成果);

 

9.GC测定艾司西酞普兰中基因毒性杂质12二溴乙烷

9.1基因毒性杂质

1,2二溴乙烷

9.2 检测方法

供试品浓度:200mg/ml. 溶剂N-Hexane is finalized as the diluent 1,2-Dibromoethane which shows goodresponse compared to Methanol and Acetonitrile.

色谱柱:DB-624 (6% cyanopropyl,94% dimethylpolysiloxane stationary phase) columnof 30 m length, 0.53 mm inner diameter and 3µmfilm thickness.

进样口温度和检测器温度: 220°C and 260℃ respectively.

分流比: 1:5 for 5µL of injection volume.

载气:Flow of carrier gas (Nitrogen) is kept at 3.30 psi at constant pressure.

升温程序: 60°C for 5 minutes then raised to 240°C at a rate.

9.3方法灵敏度

The LOD and LOQ values were foundto be 3 ppm (3 µg/g) and 10 ppm (10 µg/g) respectively.

9.4参考文献Determination of 1,2-dibromoethaneas a genotoxic impurity inescitalopram oxalate drµg substance by gaschromatography

 

10. HPLC法测定盐酸西纳卡塞中潜在基因毒性杂质3-氟甲基苯甲醛

参考文献:Determination of 3-Trifluoromethyl benzaldehyde genotoxic impurity inCinnacalcet drµg substances

11 HPLC-UV检测沙坦类药物中的叠氮.

11.1 限度

SP requirement formaximum azide content in irbesartan is10µg/g.

厄贝沙坦(Irbesartan)最大给药剂量300mg,因此叠氮最大日摄入量:0.3g*10µg/g=3µg.

11.2 检测方法

 

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11.3 检测限和定量限

The determined LODand LOQ values for azide in sartans are 0.17µgg−1 and 0.84µgg−1. With a use of aUV cell with 60mm optical path length ten times lower LOQ value was determined incomparison with the USP requirements.

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11.4 文章体会:

本品采用了流通池较长的检测器,灵敏度比常规流通池高10倍。该文献方法检测限度约为0.2ppm,常规方法可能可以到2ppm。但需要注意的是,任何检测的灵敏度实际与样品的溶解度密切相关。

11.5 参考文献:Determination of azide impurity in sartans using reversed-phase HPLC with UV detection.

12. 使用液相色谱法测定达氨吡啶中5个潜在的遗传毒性杂

12.1 基因毒性杂质结构

 

 

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12.2 限度

TCC 1.5 µg/day,最大日摄入量:20mg。限度:75ppm;

12.3 检测方法

色谱柱:The method utilizes Zorbax silica column (250 mm x 4.6 mm, 5.0 μm) with UV detector in HILIC (Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography ) mode for quantitation of five PGIs.

流动相: 10 mM 甲酸铵溶液制备的缓冲液, 用稀甲酸调节pH5.0±0.05,用0.22μm滤纸过滤溶液,标记为溶液-A。溶液 B 是通过以10:90 v/v 的比例混合甲醇:乙腈制备的。流动相是通过以15:85 v/v 的比例混合溶液 A:溶液B 制备的,等度洗脱。

流速为 1.0mL/min,运行时间为 80 分钟。柱温保持在 25°C,检测器波长保持在280 nm

进样量:20ul;供试品溶度20mg/ml

12.4   研究结果

1)色谱柱筛选:C8C18 pH 2-8 均不能很好分离。

2)流动相添加离子对试剂: 1-庚烷磺酸钠盐、1-辛烷磺酸钠盐和四丁基硫酸氢铵等对 PGIs 进行了很好的分离。然而,当对Dalfampridine 样品进行回收率研究时,PGIs在保留时间不稳定。

3)最后采用HILIC模式的Zorbax silica column (250 mm x 4.6 mm, 5.0 μm) with UV detector in HILIC(Hydrophilic Interaction Liquid Chromatography) mode for quantitation of fivePGIs.

4)典型图谱

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Fig.1. Chromatographic comparison of (A) Blank (B) Controlsample:回收率样品: LOQ levelC);100% level  (D)150% levelE

12.5 个人体会

1)当样品浓度较高时,基因毒性杂质的色谱峰形很容易收到供试品过载的影响,导致色谱峰变形;

2)与API具有类似的警示结构往往同样作为基因毒性杂质进行研究;

12.6 参考文献Determination of five potential genotoxic impurities indalfampridine using liquid chromatography

13 使用 GCMS 测定酒石酸卡巴拉汀中的基因毒性杂质

13.1 基因毒性杂质结构

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13.2 检测方法

色谱柱:DB-35,熔融石英毛细管柱;30 m 长;0.32 mm 内径,涂有 35% 苯基和 65%二甲基聚硅氧烷固定相,0.5 µm 膜厚)(制造商:J &W Scientific, Santa Clara, CA, USA)

氦气作为载气,在分流模式下以 1:2 的比例将柱压保持在 10kPa

进样口温度180°C;升温程序:

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13.3 参考文献Determinationof Genotoxic impurities in a nootropic drug, Rivastigmine tartrate by GCMS

14气相色谱-质谱法测定甲磺酸伊马替尼中的三种潜在遗传毒性杂质.

14.1 基因毒性杂质列表

 

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14.2 限度

1.5µg/最大日摄入量(800mg)=1.88ppm;

14.3 衍生化方法

使用苯甲醛缩合,二甲基亚砜,乙酸,缩合反应体系。通过改变标准品和样品制备中的体积并通过 GC-MS 观察衍生化杂质峰的响应来优化衍生化剂的浓度。作为衍生化的结果,形成了苯并嗪衍生物并且肼被确定为席夫碱。肼衍生物灵敏、稳定并产生一致的结果。检测方法:肼在转化为挥发性衍生物后进行定量,其中正十六烷作为内标。 3-乙酰吡啶和 2-甲基-5-硝基苯胺在低 ppm 水平下使用 1-二十烷醇作为内标进行测定。液体萃取程序用于样品制备。质谱检测使用选定的离子监测模式提供了良好的灵敏度和特异性。

 

检测方法:方法1:测定肼衍生物DB-5MS 色谱柱,30 m ×0.25 mm ×0.25 µmJ&WScientificAgilent Technologies,美国);压力为 60 kPa分流比1:10 1.0 µL 的进样量。初始柱温 160°C,在 40°C min-1 时升至 280°C 并保持 3分钟。进样口温度260℃。在选定的离子监测模式下,肼衍生物 [M-C6H5]  m/z 131,内标 [M-C9H19]  m/z  ¼99

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1. 肼衍生物的质谱图 (a) 肼衍生物、(b) 质荷比为 77 的离子、(c) 质荷比为 104 的离子和 (d) 质荷比为 131的离子。

方法2 DB-5MS 色谱柱,30 m ×0.25 mm ×0.25 µmJ&W ScientificAgilentTechnologies,美国);压力为 60 kPa分流比1:5 2.0 µL的进样量。初始柱温为 120°C,持续 2 分钟,在 40°C min-1 时升至 280°C,并保持6 分钟。进样口温度为260℃。测量在选定的离子监测模式下进行,3-乙酰吡啶 [M-OC2H3]  m/z  782-甲基-5-硝基苯胺的 m/z  152,内标的 m/z  111 [M-OC2H3]M-OC12H27]

14.4 灵敏度

肼、3-乙酰吡啶和2-甲基-5-硝基苯胺的检测限分别为 0.110.026 0.025 µg-1

14.5 参考文献Determinationof Three Potential Genotoxic Impurities in Imatinib Mesylate by GasChromatography—Mass Spectrometry

 15.遗传毒性杂质框架下硫酸阿巴卡韦的强制降解研究.

 

15.1 摘要

发现硫酸阿巴卡韦在酸性和氧化条件下降解,然后形成三种降解产物,通过等度 HPLC 方法将其分离。降解产物由 LC-MS 鉴定以提出降解途径,然后评估与遗传毒性杂质的结构警报的相似性。最后,可以通过 FT-IR、NMR 和 LC-MS 对遗传毒性杂质进行表征。发现硫酸阿巴卡韦对碱水解和热处理稳定,而在氧化和酸性水解中易降解。LC-MS研究结果表明,酸性条件下可能的降解物是 C8H10N6 (m/z 191.2),而氧化条件下的 C14H18N6O3 (m/z 319.2) 和 C11H14N6O (m/z247.2)。药物杂质的结构警报表明形成了可能是遗传毒性杂质的 N-羟基芳基和氮杂芳基 N-氧化物。

15.2 降解产物

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15.3 个人体会:氮很容易被氧化降解产物形成氮氧化物

15.4 参考文献 Forced degradation study of abacavir sulfate under the frame of genotoxic impurity.

16. HILIC-MS 测定沃替西汀生产过程中 2-氯-N -(2-氯乙基)乙胺的基因毒性杂质

16. 1 基因毒性杂

BCEA

16.2 合成路线

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16.3 限度计算

1.5µg/最大日摄入量=1.5µg/0.02g=75ppm

16.4 实验方法

(1)  样品浓度1mg/ml80%乙腈水)

(2)  杂质浓度0.075µg/ml

色谱柱筛选: Kinetex 2.6u HILIC 100A, 100 × 2.1 mm, 2.6 µm (Phenomenex, USA);XBridge HILIC, 150 × 4.6 mm, 3.5 µm (Waters, Czech Republic); Primesep Bcolumn, 150 × 4.6 mm, 5.0 µm (Sielc, USA) and Obelisc R, 100 × 2.1 mm, 5 µm(Sielc, USA).

色谱条件:

色谱柱:Primesep B column

流动相: 等度洗脱 acetonitrile and 10 mM ammonium formate buffer pH 3.0 in ratio 95 :5 (v/v)

流速和柱温: 0.8 mL/min and temperature of 35°C.

检测器:The QDa mass detector, probe (desolvation) temperature 600°C,nebulizer gas 7 MPa, cone voltage 15 V and capillary voltage 0.5 kV.

SIM模式 at m/z 142 as [M+H]+ .

16.5  实验结果

(1)   当乙腈含量达到 90% 时,BCEA  VOR 的保留率显着增加。pH 缓冲液在 2.8 4.8 的范围内变化。BCEA  VOR 的保留和分离度随着 pH 缓冲液的降低而增加。

(2)   灵敏度:LOD: 0.3ppm LDQ:1ppm

3)正离子模式下质谱100-350Da扫描结果;

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16.6 参考文献:HILIC–MS Determination of Genotoxic Impurity of 2-Chloro- N-(2-Chloroethyl)Ethanamine in the Vortioxetine Manufacturing Process

21. HPLC-荧光检测文献16中的(IIIIV)两个基因毒性杂质

摘要:高效液相色谱 (HPLC) 方法,用于检测和定量测定 vortioxetine 制造过程中存在的两种遗传毒性杂质。根据活性药物成分的最大日剂量计算出两种基因毒性杂质的限值均为 75 ppm。在 XSELECT Charged Surface Hybrid 上开发了具有光化学诱导荧光检测的新型反相 HPLC 方法。流动相10 mM 甲酸铵 pH 3.0 和乙腈的混合物组成,48:52 (v/v) 的等度组合物以 1.0 mL/min 的流速进行洗脱。光化学诱导荧光检测:254 nm激发波长,测量 300 nm 272nm发射波长。两种预期的遗传毒性杂质的在线光化学转换和检测很容易实现,并为目标分析提供足够低的检测和定量。

21.1 方法灵敏度 分别为0.026ppm0.015ppm

 

17.液相色谱-串联质谱法定量测定厄洛替尼中 3-乙炔苯胺含量的方法开发和验证研究.

17.1    API 与基毒杂质结构

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17.2 检测方法

LC/MS/MS 中使用的分析柱是等度模式的 HypersilBDS C8 (50 mm × 4.6 mm) 3 µm柱(Thermo Co., USA),流动相5mM醋酸铵:乙腈55:45 (v/v)流速为 0.8 mlmin-1,分流比14柱温箱温度保持在 40°C.温控盘5℃,进样量5ul

质谱参数:正离子模式,3-乙炔苯胺用其分子离子 [M+H]+m/z 118.2(质子化)和子离子 m/z 91.1 (118.2-91.1) 进行监测,厄洛替尼用其分子离子 [M+H]+ m/z394.2(质子化)。离子喷雾电压 (V)、去簇电位和入口电位分别保持为 4500 V50 V  5 V离子源气体 1 和离子源气体压力 (psi) 分别保持在 35  30碰撞能量使用 20 V

杂质对照浓度:0.0002mg/ml;样品浓度2mg/ml 100ppm(文中说是10ppm);

17.3 线性范围与检测限

0.6ppm

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17.4 参考文献: Method Development and ValidationStudy for Quantitative Determination of 3-Ethynylaniline Content in Erlotinibby Liquid Chromatography–Tandem Mass Spectrometry

18. GC-MS 方法定量双丙戊酸钠原料药中潜在的遗传毒性杂质溴丙烷.

18.1杂质结构

溴丙烷

18.2杂质限度

Depakote 片(双丙戊酸钠缓释片)用于口服给药。 Depakote片剂以三种剂量强度提供,含有相当于 125 毫克、250 毫克或 500 毫克丙戊酸的 DS DS 通常被认为是安全的,其最大推荐剂量为 60 mg/kg/天;即等于 3000mg [6]杂质不应存在于原料药中,或者根据 TTC 方法,基于原料药的日剂量,杂质应小于 0.5 µg/g

18.2检测方法

30 m 长、0.32mm 内径并涂有 3 µm 膜厚 (DB-1)  100% 二甲基聚硅氧烷固定相的熔融石英毛细管柱上进行。使用氦气作为载气,在分流模式下以 1:4 的比例将柱压保持在10kPa毛细管进样器的温度设置为 220°C,柱温箱温度设定为最初 40°C 保持 10分钟,然后以每分钟 15°C 的速度升至 220°C 并保持 3 分钟

质谱条件:离子源温度和接口温度 250°C,阈值 200 和检测器电压与调谐结果有关。

模式: SIM模式,母离子122,子离子4327

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18.3 方法检测限

0.05ppm

19. GC-MS 同时测定福多司坦药物中的遗传毒性杂质.

19.1杂质结构

3--1-丙醇,1,3-二氯丙烷 (DCP)3-醋酸氯丙酯,氯丙基丙基醚, 3--1-丙醇(CHP)为主要原料,含有1,3-二氯丙烷(DCP)3-氯丙乙酸酯(CPA)和氯丙羟丙醚(CHE)杂质

19.2限度

这些残留的基因毒性杂质应<1.25µgg-1,基于最大每日剂量为 1.2g

19.3 摘要

优化和验证了一种简单、灵敏且可靠的气相色谱质谱 (GC-MS) 方法,用于同时测定 3--1-丙醇 (CHP)1,3-二氯丙烷 (DCP)3-醋酸氯丙酯 (CPA) 和氯丙基丙基醚(CHE)以氯苯为内标,测定福多司坦中上述杂质的含量。在 Agilent J&W DB-WAXetr 上实现了高效的色谱分离,色谱柱长 30 m,内径 0.32 mm,粒径 1.0 µm,由键合和交联聚乙二醇组成,通过将氦气作为载气进行固定相。分析物在二氯甲烷中提取,并通过气相色谱电子电离质谱 (GC-EI-MS) 和选择性离子监测 (SIM) 模式进行监测。 CHPDCPCPA  CHE 的检测限和定量限分别在 0.05–0.08 µg mL-1 0.10–0.17 µg mL-1 范围内。 CHPDCPCPA CHE 的回收率 92.0-101.5% 的范围内。结果证明该方法适用于同时测定福多司坦中CHPDCPCPACHE的含量。

19.4 检测方法

GC-MS Shimadzu GCMS-QP2010.

色谱柱: 分析在 Agilent J&W DB-WAXetr 上进行,该柱长 30 m,内径 0.32 mm,粒径1.0 μm,色谱柱由键合和交联聚乙二醇作为固定相。升温程序:40°C 的初始烘箱温度保持 5 分钟,然后以 10°C/分钟的速率升至 220°C,然后在 220°C 下保持 17分钟。分析时间为 40 分钟。 进样体积为 2.0 µL,分流比设置为 2:1氦气作为载气,恒压为 10 kPa 喷油器温度、界面温度和离子源温度分别为 220220 250°C检测器电压设置为相对于调谐结果。

19.5 参考文献Quantificationof potential genotoxic impurity in Divalproex sodium drµg substance by GC-MSmethod.

20.使用 LC/Ms/Ms 对依法韦仑原料药和药品中的 (-)2- (2-amino-5-chlorophenyl)-4-cyclopropyl-1,1,1-trifluoro-3-butyn 2-ol 基因毒性杂质进行痕量定量分析.

20.1合成路线

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20.2     基因度性杂质

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20.3 液相色谱-串联质谱 (LC-MS/MS) .

分析柱Luna C18 (2)100 mm × 4.6 mm3.0 µm)柱(Phenomenex Co., Torrance, CA, USA

流动相:35:65 (v/v)  5.0 mM 醋酸铵-甲醇,等度洗脱。流速为 0.8 mL/min,分流比14。柱温箱温度保持在 45°C,样品温控为 10°C。进样量为 10 µL。在多反应监测模式下操作的正电喷雾电离 (ESI) 探针用于定量 AMCOL。对 m/z 290.2/272.1(质子化)进行监测。离子喷雾电压 (V)、去簇电位 (DP) 和入口电位 (EP) 分别保持为 5500 V50 V  10 V。帘气流、离子源气体 1 和离子源气体 2 的雾化压力分别保持在 15 psi18 psi  20 psi

20.4 典型图谱

 

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20.5 灵敏度

LOQ:0.21ppm, LDQ 0.07ppm

 

20.6 参考文献 Trace Level Quantification of the (−)2-(2-amino-5 chlorophenyl)-4-cyclopropyl-1,1,1-trifluoro-3-butyn 2-ol Genotoxic Impurity in Efavirenz DrµgSubstance and Drµg Product Using LC–MS/MS.

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